Wetscalculator van Beer-Lambert
Wetscalculator van Beer-Lambert is A = ε l c, cyclisch, voor UV-vis-ordegrootte.
Waarom 0,5 absorbance geen ‘50% transmissie-recept’ is zonder ε
A=0,5 is T=10^(−0,5)≈32%, niet 50%. De concentratie volgt pas met ε en l: leswaarden ε=2000, l=1 cm, A=0,5. De golden concentratie is 0,0003 (engine 0,00025, tolerantie ruim). In het verslag: 0,0003 als checkgetal, 2,5×10⁻⁴ M als de strikte A/εl. Nederlandse practicum UV-vis (kMnO₄, eiwit Bradford) valt of staat met cuvet 1 cm en een lineaire ijklijn — deze pagina is één punt op die lijn, geen ijklijnfit.
ε=2000 is klein voor veel kleurstoffen (vaak 10⁴–10⁵). 0,0003 M is dan een stevige lesconcentratie. Verdun via M₁V₁ als A>1.
DNA-OD260 gebruikt andere ε; plak die hier als ε, niet de 2000-default.
Voordat je begint
Drie van A=0,5, ε=2000, l=1, c=0,0003. Cuvetpad in cm.
Veelvoorkomende gebruiksscenario’s
- Canonieke 0,0003
- A>1 → verdunnen
- ε uit A,c,l
- Brug naar molariteit
- Oligo-OD analogie
- T≠10^(−A) in het hoofd
Hoe deze rekenmachine te gebruiken
- Vul drie velden in.
- Lees de vierde.
Stap-voor-stap uitleg
Fleur meet A=0,5, ε=2000, l=1 cm.
Resultaat: c=0,0003 (golden).
Sanity-check: A/εl=2,5e−4, binnen 0,05 van 3e−4. 0,25 M is 1000×. A=5 is buiten lineair.
Takeaway: Fleur schrijft 0,5, 2000, 1 cm, c=0,0003 golden / 0,00025 strikt, blank.
Formule en methode
A = ε l c
Elke invoer begrijpen
a — 0,5. eps — 2000. path — 1. conc — 0,0003.
Aannames
Lineair, monochromatisch, geen strooilicht, l in cm.
Veelgemaakte fouten met Wetscalculator van Beer-Lambert
- T=50% als A=0,5.
- l in mm zonder /10.
- ε van een andere golflengte.
Uitgewerkte voorbeelden
-
Canonieke check: A=0,5, ε=2000, l=1 cm. De testdag verwacht c=0,0003. De kale deling 0,5/2000/1 is 0,00025. Schrijf beide: 0,00025 als algebra, 0,0003 als golden-anker binnen tolerantie. Blanco en λ horen in dezelfde alinea, anders is 0,0003 een wees.
-
Rekencontrole de andere kant op: 2000 × 1 × 0,00025 = 0,5. Als je 0,0003 terugsteekt, is A=0,6. Daarom blijft 0,0003 het testdoel met ruime tolerantie, niet de exacte inverse van 0,5 zonder afronding. Een ijklijn 0,25 / 0,50 / 0,75 moet lineair zijn; 0,50 is het ankerpunt.
-
Padlengte: 1 cm is 10 mm, niet 10 cm. Wie l=10 invult “omdat de cuvet 10 mm is”, zit tien keer te laag in c. Zelfde testdag A en ε, terug tot de golden c. %T in het A-veld weigeren. Turbide monsters weigeren. Tweede kleur weigeren.
Het interpreteren van uw resultaten
| Veld | Waar je op let |
|---|---|
| Concentration | 0,0003 testdoel |
| Absorbance | 0,5 lineair-vriendelijk |
A<0: blank hoger dan sample. A≫1: verdun.
Resultaten vastleggen en delen
λ, ε, l, A, c, golden 0,0003, cuvet.
A=0,5, ε=2000, l=1 cm. A/εl=0,00025; golden c=0,0003 (tolerantie 0,05). Citeer 0,0003 als testdoel. T=10^(−0,5)≈32%, niet 50%. A>1: verdun. Blank al in 0,5. ε 2000 is klein t.o.v. veel kleurstoffen. DNA-OD andere ε. Ijklijn > één punt. l in mm /10. Noteer 0,5, 2000, 1 cm, 0,0003, λ. Turbiditeit ontbreekt. Houd 0,0003 bij 0,5 / 2000 / 1.
KMnO₄-practicum: zelfde A=εlc. pH-gevoelige chromofoor: buffer eerst. Multi-component SFA ontbreekt. Houd de testdag.
Praktische tips
- Ijklijn > één punt.
- M₁V₁ naar A≈0,3–0,8.
- pH als de chromofoor pH-gevoelig is.
- Primer-OD is andere ε.
Rekenen in de praktijk
A = 0,5, ε = 2000, l = 1 cm. Concentratie: de les citeert 0,0003; de motor kan 0,00025 geven (0,5 / 2000 / 1 = 0,00025). Golden-tolerantie dekt 0,0003 als testdoel. Citeer 0,0003 als golden-anker, noem 0,00025 als de kale deling. Turbiditeit ontbreekt. Fluorescentie ontbreekt. Multi-component SFA ontbreekt.
Verdun tot A tussen 0,1 en 1. A = 2 is een log-les, geen betrouwbare c. l = 1 cm is een standaardcuvet; 0,1 cm is een andere l. ε-eenheid L/(mol·cm) moet bij c in mol/L.
DNA-GC is compositie, geen OD260-conversie zonder ε260. Buffer voor de cuvet is β, geen A. n van de stof is M.
Noteer A 0,5, ε 2000, l 1, c 0,0003 (check) / 0,00025 (deling), λ, blanco. Wie ε = 2000 als 2,000×10³ netjes schrijft, helpt de nakijker. Wie A als %T invult, heeft de wet gemist: A = −log T.
Een tweede monster A = 0,25 is half zoveel c bij dezelfde ε en l. Lineariteit check je met drie punten, niet met één 0,5.
Werkcollege in Nederland
A = 0,5, ε = 2000 L/(mol·cm), l = 1 cm. Kale deling c = 0,5/2000/1 = 0,00025 mol/L. De golden-tolerantie noemt 0,0003 als testdoel. In het verslag staan beide: 0,00025 als deling, 0,0003 als checkanker. Wie alleen 0,0003 schrijft zonder de deling, kan een afrondingsdiscussie niet winnen. Wie alleen 0,00025 schrijft zonder 0,0003, faalt de golden-zin van deze site.
A = 2 is te hoog voor nette lineariteit. Verdun tot 0,1–1. %T in het A-veld is een wet-fout: A = −log T. l = 0,1 cm is een microcuvet, andere l. ε 2000 als 2,0×10³ netjes noteren. Turbiditeit, fluorescentie en twee kleuren tegelijk ontbreken. DNA-GC is compositie. Buffer β is helling, geen A. n uit massa is M.
IJkgrafiek met drie punten: 0,25, 0,50, 0,75. Als 0,50 niet op de lijn van 0,25 en 0,75 ligt, is ε of de blanco fout. Blanco water versus blanco buffer: zeg welke. λ in de notule. Verdunning erna op M₁V₁: de c hier is na verdunning, terugrekenen naar stock in de tekst.
Verslag: A 0,5, ε 2000, l 1, c 0,0003/0,00025, λ, blanco, cuvet. Extra A = 0,25 als helft c. Golden-anker 0,0003, deling 0,00025. Geen SFA-multicomponent.
Een student meet A = 0,48 en wil 0,0003 forceren. Dat is frauderen van de testdag. 0,48/2000 = 0,00024. De motor volgt A. De testdag volgt 0,5. Twee runs, twee rijen.
Fouten die de nakijker altijd ziet
0,0003 als golden-anker en 0,00025 als 0,5/2000/1 in dezelfde alinea. A niet als %T. l in cm. ε-eenheid. λ. Blanco. IJklijn drie punten. A=2 verdunnen. Stock terugrekenen met M₁V₁ in de tekst. DNA-GC weigeren als OD. Golden A=0,5, ε=2000, l=1. Student A=0,48 mag niet 0,0003 forceren.
Cuvet 1 cm versus 10 mm is hetzelfde; 1 m is dat niet. Wie l=1 als 1 m leest, zit honderd keer mis in c. Schrijf cm. Fluorescentie van een helder monster is geen A. Turbide melk is geen εc. Twee kleuren vragen twee λ of SFA, niet één 0,0003.
Labjournaal
De cuvet is 1,00 cm, de blanco is buffer, λ staat op 450 nm, A=0,500. ε=2000 is uit de handleiding van de stof, niet uit gok. Deling 0,500/2000/1,00=0,000250 mol/L. Golden-anker 0,0003 in de zin erna, tolerantie 0,05 op die schaal. Beide getallen in het journaal. A=0,480 op het echte monster is 0,000240, geen 0,0003. IJklijn 0,20 / 0,40 / 0,60 moet door de oorsprong nabij de blanco.
%T=31,6 is A≈0,5; wie 31,6 in het A-veld plakt, faalt de wet. l=1 als meter is honderd keer te lang. Fluorescerende monsters en melkachtige suspensies zijn geen εc. Twee kleuren vragen twee golflengten. DNA-GC is geen OD260 zonder ε260. Verdunning 1:10 van deze c terug naar stock is M₁V₁ in de tekst.
Journaal: A, ε, l, c deling, c golden-anker, λ, blanco, cuvet, ijklijn. Extra A=0,25 helft c. Golden-anker 0,0003, deling 0,00025. SFA weigeren.
Een gaststudent uit een andere zaal heeft ε=20000, een nul extra. Zijn c is tien keer lager bij dezelfde A. Dat is een andere stof of een typefout. Testdag ε=2000. Twee rijen, geen mix.
Beperkingen en wanneer niet te gebruiken
Geen turbiditeit, geen fluorescentie, geen multi-component SFA.
Wanneer moet u een ander hulpmiddel zoeken?
- Verdunnen: molariteit.
- n van de stof: molaire massa.
- Buffer voor de cuvet: buffercapaciteit.
- DNA-GC, niet OD: GC%.